Валидация биоаналитических методик проводится в соответствии с действующими нормативными требованиями, регламентированными Руководством по экспертизе лекарственных средств(Том I. – ФГБУ НЦЭСМП, 2013), Руководством по валидации биоаналитических методов EMEA/CHMP/EWP/192217/2009, рекомендациями FDA Bioanalytical Method Validation(2013), а также с учётом Правил проведения исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов в рамках Евразийского экономического союза(согласно решению Совета Евразийской экономической комиссии«Об утверждении Правил проведения исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов в рамках Евразийского экономического союза»)
Валидация аналитической методики проводится по следующим основным параметрам:
селективность(selectivity)
оценка нижнего предела количественного определения, НПКО(lower limit of quantitation, LLOQ)
линейность(linearity)
правильность(accuracy)
прецизионность(precision)
эффект переноса(carry-over)
эффект матрицы(matrix effect)
степень извлечения(recovery)
тест на разведение(dilution integrity)
оценка минимальных откликов аналита и внутреннего стандарта(minimal values of analyte and IS response)
стабильность(stability)
обратная конверсия метаболитов(back-conversion of metabolites), если применимо.
Разработка и валидация аналитической методики проводятся специалистами ООО«Квинта-Аналитика Ярославль» индивидуально в рамках каждого исследования.
Особое внимание уделяется таким параметрам аналитической методики, как:
оптимальный метод пробоподготовки: осаждение белка(protein precipitation), твердофазная экстракция(solid phase extraction), жидкость-жидкостная экстракция(liquid-liquid extraction) в зависимости от целевого диапазона концентраций и физико-химических свойств аналитов
выбор хроматографических колонок и компонентов подвижной фазы, обеспечивающих наилучшие аналитические характеристики(чувствительность, селективность, линейность и др.), включая устойчивость методики в условиях её продолжительного применения при анализе большого количества проб; предпочтение отдаётся двумерным хроматографическим методам
выбор условий детектирования: тип ионизации(ионизация электрораспылением с термофокусировкой – ESI, химическая ионизация при атмосферном давлении – APCI, сдвоенная система ионизации DUIS); выбор MRM-переходов, обеспечивающих наилучшую чувствительность и селективность методики
оценка эффекта компонентов биологической матрицы на эффективность ионизации определяемого вещества, возможность минимизации эффекта матрицы
выбор внутреннего стандарта, обеспечивающего максимальную точность количественной оценки; предпочтение отдаётся стабильным изотопно-меченым внутренним стандартам, идентичным по физико-химическим свойствам определяемому веществу, и имеющим отличия от него только по масс-спектру
если в ходе биотрансформации определяемого вещества образуются метаболиты, способные к обратной конверсии в исходное соединение при хранении проб или при выполнении аналитических процедур(глюкурониды, N-оксиды, лактоны и др.), принимаются специальные меры для минимизации обратной конверсии и устранения влияния данного процесса на получаемые результаты
оценка стабильности определяемого вещества в биологической матрице и растворах; выполнение тестов на стабильность аналита в биологической матрице(краткосрочная стабильность, долгосрочная стабильность в двух температурных режимах: не выше -20°С и не выше -70°С, стабильность при замораживании – размораживании) является обязательным до начала клинической части исследования; в случае выявления нестабильности определяемого вещества проводится разработка методики стабилизации и выбор специальных условий выполнения аналитических процедур и хранения образцов
при исследовании комбинированных лекарственных форм проводятся отдельные валидационные тесты по влиянию на получаемые результаты совместного присутствия нескольких веществ в анализируемых образцах.